خلاصه فارسی…………………………………………………………………………………………………………………………………………1

   فصل اول: کلیات

مقدمه ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………..2

1-1-  بیان مسئله……………………………………………………………………………………………………………………………………4

1- 2 -اهداف  پژوهش…………………………………………………………………………………………………………………………….5

1-3-  ضروریت انجام تحقیق………………………………………………………………………………………………………………….6

1-4- تولید جنین در شرایط in vivo

1-4-1- روند ایجاد سلول جنسی ماده………………………………………………………………………………………….6

1-4-1-1- ویژگی­های اووسیت ثانویه…………………………………………………………………………………………………….8

1-4-2- روند ایجاد سلول جنسی نر……………………………………………………………………………………………………….9

1-4-3- لقاح………………………………………………………………………………………………………………………………………….10

1-4-4- تسهیم……………………………………………………………………………………………………………………………………..12

1-5- تولید جنین در شرایط in vitro

1-5-1- بلوغ آزمایشگاهی تخمک (IVM)………………………………………………………………………………………….15

1-5-2- ظرفیت پذیری اسپرم………………………………………………………………………………………………………………19

1-5-3- لقاح در شرایط آزمایشگاهی(IVF)………………………………………………………………………………………..21

1-5-4-کشت جنین در شرایط آزمایشگاهی(IVC)……………………………………………………………………………23

1-6- مقایسه جنین­های طبیعی با جنین­های آزمایشگاهی………………………………………………………………….26

1-7- انجماد

1-7-1- مراحل اصلی انجماد………………………………………………………………………………………………………………..30

1-7-2- راه­های کاهش اثرات زیانبار مواد محافظت کننده…………………………………………………………………..30

1-7-3- روش­های انجماد……………………………………………………………………………………………………………………..30

1-7-3-1- انجماد شیشه ­ای………………………………………………………………………………………………………………….31

1-7-3-1-1- عوامل تکنیکی موثر در انجماد شیشه ­ای……………………………………………………………………….32

1-7-3-1-1-1- زمان تعادل و آبگیری………………………………………………………………………………………………..32

1-7-3-1-1-2- سرعت سرد کردن……………………………………………………………………………………………………..32

1-7-3-1-1-3- سرعت گرم کردن………………………………………………………………………………………………………35

1-7-3-1-1-4- مواد محافظ انجمادی…………………………………………………………………………………………………35

1-7-3-1-1-5- نقش ضد یخ­ها……………………………………………………………………………………………………………36

1-7-3-1-1-6- ذوب و آبدهی…………………………………………………………………………………………………………….. 36

1-8- آلدوسترون…………………………………………………………………………………………………………………………………….37

1-8-1- خصوصیات……………………………………………………………………………………………………………………………….37

1-8-2- عملکرد…………………………………………………………………………………………………………………………………….38

1-9- ارزیابی کیفیت رویان……………………………………………………………………………………………………………………41

1-10- سلول­های رویانی……………………………………………………………………………………………………………………….43

فصل دوم: بر متون گذشته

2-1- اثرات انجماد بر روی تخمک………………………………………………………………………………………………………..46

2-2- اثر روش انجماد شیشه ­ای…………………………………………………………………………………………………………….47

2-3- بیان زیر واحد­های پمپ Na/K ATpase در تخمک و جنین…………………………………………………48

2-4- پمپ  Na/K ATpase ……………………………………………………………………………………………………………49

2-5- آکواپورین­ها………………………………………………………………………………………………………………………………….51

2-6- هچ یا تفریخ………………………………………………………………………………………………………………………………….52

2-7- فعال شدن ژنوم رویانی………………………………………………………………………………………………………………..55

2-8- متابولیسم رویان…………………………………………………………………………………………………………………………..56

2-9- نقش آلدوسترون در بیان پروتیین Na/K ATpase………………………………………………………………..58

فصل سوم: مواد و روش­ها

3-1- تولید جنین های حاصل از لقاح خارج رحمی (IVF)

3-1-1- جمع‌ آوری تخمدان‌ها از کشتارگاه و استحصال تخمک‌ها از مایع فولیکولی……………………………61

3-1-2- بلوغ آزمایشگاهی تخمک‌ها (IVM) .. …. . ..62

3-1-3- لقاح داخل آزمایشگاهی (IVF)……………………………………………………………………………………………..63

3-1-3-1- آماده سازی اووسیت­های بالغ شده برای لقاح…………………………………………………………………….63

3-1-3-2- آماده سازی اسپرم………………………………………………………………………………………………………………63

3-1-4- کشت داخل آزمایشگاهی جنین های حاصل از(IVF)………………………………………………………….64

3-1-5- تازه كردن محیط کشت جنین‌ها…………………………………………………………………………………………….65

3-2- تهیه محلول‌های انجمادی……………………………………………………………………………………………………………65

3-3- مراحل انجام روند انجماد شیشه ای…………………………………………………………………………………………….66

3-4- محیط ذوب…………………………………………………………………………………………………………………………………..66

3-5- گروه­های آزمایشی و طراحی مطالعه……………………………………………………………………………………………66

3-6- ارزیابی جنین‌ها

3-6-1- ارزیابی کیفی جنین‌ها با بهره گرفتن از رنگ‌آمیزی افتراقی………………………………………………………….68

3-7- ایمونوسایتوشیمی پروتئین­های سطحی جنین های گوسفندی(Sheep embryo ICC)……..70

فصل چهارم: نتایج

4-1- تخمک­های منجمد شده

4-1-1- گروه آزمایشی اول، افزودن آلدوسترون به محیط IVM تخمک­های

منجمد-ذوب شده در مرحله GV………………………………………………………………………………………………………….82

4-1-2- گروه آزمایشی دوم، افزودن آلدوسترون در روز چهارم

جنینی (D4)، به محیط کشت جنین­های حاصل از تخمک­های منجمد-ذوب شده…………………………….82

4-1-3- گروه آزمایشی سوم، افزودن آلدوسترون در طی IVM،

ومتعاقباً انجماد تخمک ها در مرحله MII……………………………………………………………………………………………..83

4-1-4- گروه آزمایشی چهارم، یا گروه کننرل……………………………………………………………………………………..83

4-2- تخمک های منجمد نشده

4-2-1- گروه آزمایشی پنجم، افزودن آلدوسترون به محیط IVM تخمک­های غیر منجمد……………….85

4-2-2- گروه آزمایشی ششم، افزودن آلدوسترون در روز چهارم جنینی (D4)، به محیط کشت جنین­های حاصل از تخمک­های غیر منجمد………………………………………………………………………………………………….85

4-2-3- گروه آزمایشی هفتم، یا گروه کنترل……………………………………………………………………………………….86

4-3-

فصل پنجم: بحث و پیشنهادات

بحث………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..89

نتیجه ­گیری………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 94

پیشنهادات………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 95

منابع………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 96

خلاصه انگلیسی………………………………………………………………………………………………………………………………..113